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超微量分光光度計應用原理分析

更新時(shí)間:2024-05-31      點(diǎn)擊次數:166
  是一類(lèi)很重要的分析儀器 ,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長(cháng)濃度的定量。
 
  應用:物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究,化工、醫藥、環(huán)境檢測、冶金等現代生產(chǎn)與管理部門(mén)。
 
  分光光度計的設計原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內變化,即儀器有一定的準確度和精確度。如德國伯赫Colibri超微量分光光度計的準確度≤1.0%(1A)。這樣多次測試的結果在均值1.0%左右之間變動(dòng),都是正常的。另外,還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時(shí),離子濃度太高,也會(huì )導致讀數漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,如TE,可大大穩定讀數。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了大程度減少顆粒對測試結果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值最好在0.1-1.5A。在此范圍內,顆粒的干擾相對較小,結果穩定。
 
  混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現負值;混合液不能存在氣泡,空白液無(wú)懸浮物,否則讀數漂移劇烈;必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大;換算系數和樣品濃度單位選擇一致;不能采用窗口磨損的比色杯;樣品的體積必須達到比色杯要求的最小體積等。
 

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